There seems to be a fair degree of

There seems to be a fair degree of interest in the use of in gel kinase
assays and the literature contains many reports of the "successful" use of
the approach. However, I am frankly concerned about the specificity and
reliability of this approach. It has been used most commonly for the study
of MAP kinases and has typically employed the use of myelin basic protein
(MBP) as a substrate. MBP is an extremely promiscuous substrate. Even
highly specific kinases such as Mek1 have been found to phosphorylate MBP
in vitro. Furthermore, there seems to be many more MAP kinase-like isoforms
besides Erk1, Erk2, p38 Hog, SAPK/JNK in the 40 to 46 kDa range depending
on the species and tissue under examination. With as much as 2000 protein
kinases predicted to exist in the human genome, the assignment of a
radioactive band from an in gel assay to a specific kinase is rather a
dubious proposition at best. An approach that might circumvent some of my
concerns could involve first the specific immunoprecipitation of the kinase
of interest, and then the application of the in gel kinase assay approach.
This would markedly reduce the chance of a non-specific endogenous
substrate for a kinase in the kinase sample comigrating with that kinase on
the SDS-PAGE gel. Furthermore, the size of the radioactive band following
autoradiography should correspond to the predicted size of the target
kinase. This would further ensure that the antibody selectively
immunoprecipitated the target kinase and not an immunologically related
kinase. Incidently, the inclusion of trimethylamine N-oxide or possibly
betaine could improve the rate and degree of renaturation of kinases from
the SDS-PAGE. These reagents are known to improve the renaturation of
urea-treated proteins in solution. I would be pleased to learn if anyone
has tried the in gel kinase assay on immunoprecipitated protein kinases and
compared the data to the results from the straight in gel kinase assay.

결과 (한국어) 1:

젤 키에서의 사용에 대 한 관심의 공정한 정도 있을 것합니다분석 실험 및 문학의 "성공적인" 사용의 많은 보고서가 포함 되어접근입니다. 그러나, 나는 솔직히 특이성에 대 한 우려와이 방법의 신뢰성입니다. 그것은 가장 일반적으로 연구에 대 한 사용 되었습니다.지도 kinases는 일반적으로 myelin 기본적인 단백질의 사용을 고용 하 고(MBP) 기판으로. MBP는 매우 난잡 한 기판 이다. 심지어Mek1 같은 매우 구체적인 kinases MBP phosphorylate 발견 되었습니다.생체 외에서. 게다가, 많은 더 많은 지도 키 니 아 제 같은 isoforms 있을 것 같습니다.게다가 Erk1, Erk2, p38 돼지, SAPK/46 40 kDa 범위 따라에 설립종 및에 조직 검사에서. 으로 2000 단백질으로kinases 예측 인간 게놈의 할당에 존재 하는방사성 밴드에 젤에서 특정 키를 분석 결과 오히려 한고작 반신반의 제안입니다. 일부를 우회 수 있습니다 하는 방법 내문제는 키의 특정 immunoprecipitation를 먼저 포함할 수 있었다관심, 그리고에 젤의 응용 프로그램의 키 니 아 제 분석 결과 접근.이 현저 하 게 비-특정 내 생의 기회를 줄일 것니는 니 샘플 comigrating 그 니에와 함께에서 대 한 기판SDS 페이지 젤입니다. 또한, 방사성 밴드 다음의 크기autoradiography 대상의 예상된 크기에 해당 한다키 니 아 제입니다. 이 것 확인 하는 항 체 선택적으로immunoprecipitated 대상 키 고 하지는 면역학 관련키 니 아 제입니다. 덧붙여, trimethylamine N 산화물의 포함 또는betaine 속도에서 kinases renaturation의 정도 향상 시킬 수 있습니다.SDS 페이지입니다. 이 시 약의 renaturation 개선으로 알려져 있습니다.솔루션에서 요소 치료 단백질입니다. 누구 든 지 배울 기뻐할 것 이다에 젤을 시도 했다 immunoprecipitated 단백질 kinases 분석 결과 키 고젤 니 분석 결과에서 직선에서 결과 데이터를 비교합니다.

결과 (한국어) 2:

이 젤 키나제에서의 사용에 대한 관심의 공정한 정도 될 것으로 보인다
분석 및 문헌의 "성공"사용의 많은 보고서가 포함되어
접근을. 그러나, 나는 특이 대해 솔직히 걱정
이 방법의 신뢰성. 이 연구를 위해 가장 일반적으로 사용 된
MAP 키나제의 통상적 미엘린 염기성 단백질의 사용을 채택하고있다
기질로서 (MBP)를. MBP는 매우 불규칙 기판이다. 심지어
같은 MEK1과 같은 매우 구체적인 키나제는 MBP을 인산화하는 것으로 밝혀졌다
체외에서. 또한, 더 많은 MAP 키나제와 같은 동종있을 것 같습니다
ERK1, ERK2, 따라 40 ~ 46 kDa의 범위에서 P38의 돼지, SAPK / JNK 외에
시험에서 종과 조직에 있습니다. 많은 2000 단백질로
인간 게놈에 존재하는 예측 키나제, a의 할당
특정 키나제에 젤 분석에서의 방사성 밴드는 오히려이다
에서 가장 의심스러운 제안. 내 일부 피할 수 접근
우려 제 키나제의 특정 면역 관련 수
관심을하고 겔 키나제 분석 방법에서의 적용.
이 현저 비특이적 내인성 가능성 줄일
키나제에 대한 기판 해당 키나제와 comigrating 키나제 샘플
SDS-PAGE 젤. 또한, 방사성 밴드 다음의 크기
오토 라디오 대상의 예상 크기에 대응한다
키나아제. 이는 상기 항체가 선택적으로 확인 할
표적 키나아제 아니라 면역 학적으로 관련된 면역
키나아제. Incidently, 트리메틸 아민 옥사이드 또는 N 가능성의 포함
베타인은 속도에서 키나제의 탈 변성 정도 향상시킬 수
SDS-PAGE를. 이 시약의 탈 변성 개선하는 것으로 알려져있다
솔루션의 요소 처리 된 단백질을. 사람이 있다면 배울 기뻐할 것이다
면역 단백질 키나제에 젤 키나아제 분석을 시도하고있다
겔 키나아제 분석에서 직선의 결과에 대한 데이터를 비교했다.

결과 (한국어) 3:

마치 정도의 관심 사용 겔 키나아제문헌 분석 보고서, 많은 "성공" 사용이 방법은.근데 나 솔직히 관심을 특수성.이 방법은 신뢰도.이미 이 연구 가장 상용하는지도 키나아제, 보통 염기성 단백질 운용()) 을 기질.매우 방탕한 기질 (.심지어아주 특별한 등 키나아제 이미) 신호를 인산체외 배양.또 많은 지도 키나아제 것 같은 종류인 - 2, 말고, 돼지, 지금 각각 / - - 의지 40, 46 범위그냥 가지, 조직 검사.최대한 2000 단백질키나아제 예측 존재 중 한 사람, 분배방사성 밴드 젤 방법 한 구체적인 키나아제 아주기껏해야 수상한 명제.아마 굳이 방법 좀 내걱정 관련된 구체적인 수비법 먼저 이 키나아제취미 중, 그리고 젤 키나아제 분석 방법이다.이렇게 비 뚜렷하게 줄일 수 있는 기회를 한 낯선베이스 위해 키나아제 comigrating 키나아제 샘플 그 키나아제- 겔.또 그 다음 크기 방사성 밴드반드시 스스로 예측 목표 크기키나아제.이 더 확보 항체 선택도목표 키나아제 한 후에, 눈 안 관련키나아제.질소 산화물 한마디 할 겸, 또는 "제3아민베타인 유리하다 속도와 정도가 본성 키나아제-.이 약은 모두 개선 본성치료 방법을 단백질 요소 중.나는 기꺼이 배울 수 있다면이미 한번 겔 키나아제 테스트, 후에 키나아제그 결과 비교적 데이터 계속 겔 키나아제 법.